第一个广泛应用于小分子选择性靶蛋白降解的E3连接酶是Cli-RING泛素连接酶（CRL）组分VHL。通过基于经典片段的方法开发基于羟脯氨酸的HIF1衍生的VHL结合肽的小分子模拟物，实现了这一突破。该蛋白为E3泛素连接酶复合体Elongin B/C-CUL2-VHL的组成部分。VHL可以使缺氧诱导因子-1α（HIF1α）泛素化导致HIF1α的降解。2012年Buckley等人发表了第一个抑制 VHL-HIF1α相互作用的小分子化合物，该VHL配体可与VHL中 HIF1α识别位点偶联，结果显示该PROTAC在100 nm（DC₅₀）下可诱导其靶蛋白50%的降解。重要的是，这种PROTAC被证明在体内是有活性的；在使用PROTAC治疗之后，小鼠心脏，肾脏和 MDA-MB-231异种移植肿瘤的ERRα水平分别降低了约44%、44%和 39%。因此该设计被广泛应用于PROTAC的设计中，研究发现此类PROTAC可同时降解丝氨酸/苏氨酸激酶RIPK2。

Bondeson等将VHL配体和噻唑烷二酮类小分子连接得到了降解 ERRα的PROTAC，该化合物可有效降低细胞内ERRα水平（DC₅₀=100  nM），最大降解率为86%。另外，他们将VHL配体和RIPK2抑制剂连接得到了降解RIPK2的PROTAC-3，在10n M的低浓度条件下降解能力达到最大值（Dmax）为95%。阴性对照差向异构体PROTAC_RIPK2_epi不能降解RIPK2。与基于CRBN的PROTAC不同，VHL PROTAC具有完美的对照构型（氢脯氨酸差向异构体），这将使得在降解和抑制之间可以进行更准确的比较。研究发现在4h 内就用PROTAC_RIPK2实现了最大程度的RIPK2敲低，而RIPK2的半衰期约为60 h。

小分子VHL配体也已用于靶向BRD4的PROTAC中。Zengerle 等将BRD4抑制剂JQ1和VHL配体连接得到比d BET1更稳定的 PROTAC MZ1和MZ2。然而两种PROTAC在24h内诱导BRD4降解，具有较短PEG连接基的MZ1表现出更高的功效。有趣的是，与基于CRBN的BRD4靶向PROTAC ARV-825和d BET1作对比，这些化合物在24小时后仅观察到BRD2和BRD3的部分降解，而这些相互矛盾的结果提出了一个问题，即募集不同的E3连接酶是否会导致不同的选择性特征。然而，即使MZ1（在100 nM处BRD4减少90%）在降低BRD4水平方面比ARV-825效力小，但它显然与d BET1 相当。这些观察结果表明，至少就靶向BRD4而言，可募集VHL或 CRBN E3连接酶用于有效的PROTAC介导的降解。然而，两种E3连接酶的头对头比较可能有助于更好地了解选择哪种E3连接酶用于下一代PROTAC，以获得更高的效力和选择性。另外，这一发现再次表明，连接体的组成和长度是决定PROTAC效力的关键变量。

参考文献：

[1] 王诗慧. 靶向泛素化降解PLK1和BRD4蛋白的蛋白降解靶向嵌合体设计、合成以及生物活性研究[D]. 吉林大学, 2019.

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